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各位科研伙伴,類器官培養(yǎng)試劑選擇記住三個(gè)黃金法則,2 分鐘掌握關(guān)鍵 ——
一、基質(zhì)膠:搭好三維 “腳手架"
天然基質(zhì)(如 Matrigel)像真實(shí)細(xì)胞外基質(zhì),選它看兩點(diǎn):
? 硬度適配:腸類器官用軟基質(zhì)(濃度 1.2-2.4 mg/mL),肝類器官用中等硬度,別搞錯(cuò)!
? 批間穩(wěn)定:必須選低內(nèi)毒素(<5 EU/mL)、無支原體的批次,到手先測成球率,1000 個(gè)細(xì)胞 72 小時(shí)成球>80% 才合格。
合成基質(zhì)(如 PEG 水凝膠)成分純、無動(dòng)物源,適合培養(yǎng)或研究基質(zhì)單獨(dú)作用。
二,培養(yǎng)基:配好營養(yǎng) “信號餐"
基礎(chǔ)培養(yǎng)基按器官選:腸胃用 MEM/NEAA,肝腎用 DMEM/F12,都要無酚紅、低糖版。
關(guān)鍵生長因子是靈魂:
? 腸肺類器官離不開 Wnt 激動(dòng)劑(R-spondin 1+Noggin),純度>95% 才有效;
? 分化期加對應(yīng)因子,比如腎類器官加 BMP-7,胰腺類器官抑制 TGF-β,濃度隨階段調(diào)。
傳代時(shí)加 Y-27632,24 小時(shí)內(nèi)提高貼壁存活率,新手可用!
三,質(zhì)量控制:避開試劑 “雷區(qū)"
? 安全性:內(nèi)毒素<1 EU/mL(高了類器官會(huì)發(fā)炎),無菌檢測做 14 天,支原體用 MycoAlert 快篩;
? 功能性:成球率>80%,還要有典型結(jié)構(gòu)(比如腸類器官長隱窩),測基因確保沒 “長歪";
? 批間穩(wěn)定:同一批試劑傳 10 代以上,別讓類器官越養(yǎng)越差。
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